DNA如何檢測飲用水中的病毒?
DNA分子雜交技術
把水中全部的遺傳物質固定到一張膜上,然后把待測病毒的DNA用放射形元素標記好,在膜上培養,那么如果膜上有這種病毒,就會與其雜交,從而有放射性。
所以最后拿水沖洗膜,看膜上有沒放射性就好
利用RT-PCR獲得目的基因時,如何鑒定有沒有DNA污染?如何設計實驗防止污染?
先電泳看看帶的大小對不對,如果目的帶清晰,而且沒有太多的其他雜帶,則可以進一步測序,如果實驗室有條件的,可以在測序前,把PCR產物連接到T載體上,然后T載體去測序,測序后進行比對,看看跟擴增的是不是目的基因,如果是,從測序可以看出沒有出現漏堿基或是移碼之類的。
如果電泳結果出現很多雜帶(包含目的帶),則說明特異性不強,需要重新做PCR,把退火溫度重新設定一下,一般是把退火溫度調些。如果退火溫度調高了,還是有很多雜帶,則說明你的引物特異性不強,需要再重新設計引物。
你指的DNA污染是指什么?提RNA時在最后一步時,加上DNA酶,保溫一段時間,PCR時,可以做空白對照,如果邊空白對照都能擴增出條帶,則說明你的試劑盒或是蒸餾水污染了
DNA定量測定都有什么方法
1.紫外分光光度計測
2,熒光定量PCR測
3,用試劑盒測(有那種特異結合DNA的染料的試劑盒)
論述RT-PCR檢測基因表達的實驗步驟及如何判斷并消除DNA污染所造成的影響。
RT-PCR實驗,主要分為3步:
1. total?RNA的提取
2. mRNA的反轉錄
3. 熒光定量PCR
由于字數限制,詳細步驟可以參考下面網址。
消除DNA污染:
1. 按照說明書加入足量的Trizol,細胞過多會引起DNA污染。
2. 現在已經有去除基因組污染的反轉錄試劑盒,已經在很多實驗室常用。你可以嘗試一下。
HBV-DNA檢測方法有哪些
長沙方泰肝病醫院專家栗青艷教授介紹,通常情況下,病毒載量大于10的5次方是需要治療的,但是這也要分兩種情況,一種是處于肝炎的活動期,轉氨酶高,這是需要抗病毒治療的,還有一種情況,病毒載量也是大于10的5次方,但是病人的肝功是正常的,這些病人需要肝臟的穿刺檢查,肝臟的活檢。HBV-DNA檢測方法有:斑點雜交法。此方法是傳統的方法,成本比較低,但是靈敏度不高,精準度不高,出現假陽性的幾率比較高,只能做定性檢測,不能做乙肝定量檢測,即只能檢測DNA是陽性還是陰性,不能檢測出乙肝病毒在身體內的含量。PCR法。PCR法是基因檢測中使用最多的方法,是聚合酶鏈式反應的簡稱,是一種酶促反應。此方法可以在短時間內將待測基因擴增到上百萬倍,這樣可以大大提高基因診斷的準確度,保證此檢查方法的靈敏度。分為三步,第一是對待測的基因進行PCR,然后電泳此結果,接下來就是對此結果進行分析。這樣不僅可以定性乙肝病毒DNA檢測,還可以定量檢測,而且也可以判斷基因段是否有缺失或者變異,這樣可以準確判斷病情。一般來說,HBV-DNA檢測分為三步,第一是對待測的基因進行PCR,然后電泳此結果,接下來就是對此結果進行分析。這樣不僅可以定性乙肝病毒DNA檢測,還可以定量檢測,而且也可以判斷基因段是否有缺失或者變異,這樣可以準確判斷病情。更為重要的是,乙肝檢查必須去正規的肝病專科醫院,只有正規的醫院才能保證檢查結果的準確性,長沙方泰醫院是全國首批開展乙肝病毒DNA基因檢測技術治療肝病專業醫院之一。
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