一、濾過滅菌法原理？

過濾除菌法是用物理阻留的方法將液體或空氣的細(xì)菌除去，以達(dá)到無菌目的。所用的器具是含有微小孔徑的濾菌器。主要用于血清、毒素、抗生素等不耐熱生物制品及空氣的除菌。常用的濾菌器有薄膜濾菌器(0.45μm和0.22μm孔徑)、陶瓷濾菌器、石棉濾菌器、燒結(jié)玻璃濾菌器等。

過濾滅菌法是利用細(xì)菌粒徑大，不能通過致密具孔濾材的原理以除去液體或氣體中微生物。

1、慣性撞擊截留作用

當(dāng)含有微生物顆粒的空氣通過濾層時(shí)，空氣流僅能從纖維間的間隙通過，由于纖維縱橫交錯(cuò)，層層疊疊，迫使空氣流不斷改變運(yùn)動(dòng)方向和速度。由于微生物顆粒的慣性大于空氣，因而當(dāng)空氣流遇阻而繞道前進(jìn)時(shí)，微生物顆粒未能及時(shí)改變它的運(yùn)動(dòng)方向，而撞擊并被截留于纖維的表面。

攔截截留作用

當(dāng)空氣通過過濾層的氣速較低時(shí)，慣性撞擊截留作用作用很小，攔截截留作用起主要作用。當(dāng)微粒直徑小、質(zhì)量輕，它隨氣流運(yùn)動(dòng)慢慢靠近纖維時(shí)，微粒所在主導(dǎo)氣流流線受纖維所阻改變流動(dòng)方向，繞過纖維前進(jìn)，并在纖維的周圍形成一層邊界滯留區(qū)，滯留區(qū)的氣流流速更慢，進(jìn)到滯留區(qū)的微粒慢慢靠近和接觸纖維而被黏附截留。

布朗擴(kuò)散截留作用

當(dāng)空氣通過過濾層時(shí)，直徑很小的微粒在緩慢流動(dòng)的氣流中，會(huì)有明顯的布朗運(yùn)動(dòng)，促使微粒和纖維接觸和被捕集。這種作用在較大的氣速、較大的纖維間隙中不起作用，因?yàn)榇藭r(shí)布朗運(yùn)動(dòng)不明顯。

二、液體培養(yǎng)基滅菌方法？

培養(yǎng)基的滅菌方法

1、高壓蒸汽滅菌：

高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養(yǎng)基在愛制備過程中混入各種雜菌，分裝后應(yīng)立即滅菌，至少應(yīng)在24h內(nèi)完成滅菌工作。滅菌時(shí)一般是在0.105MPa壓力下，溫度121℃時(shí)，滅菌15~30min即可。消毒時(shí)間不宜過長，也不能超過規(guī)定的壓力范圍，否則有機(jī)物質(zhì)特別是維生素類物質(zhì)就會(huì)在高溫下分解，失去營養(yǎng)作用，也會(huì)使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色，甚至難以凝固。將蒸餾水或自來水裝在三角瓶中，裝水量一般不超過瓶的2/3，用牛皮紙或硫酸紙包扎封口，然后放入高壓鍋中滅菌后即為無菌水。 滅菌后的培養(yǎng)基可放到培養(yǎng)室中預(yù)培養(yǎng)3d，若無污染現(xiàn)象，則證明滅菌是徹底的，可以使用。暫時(shí)不用的培養(yǎng)基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培養(yǎng)基應(yīng)在1周內(nèi)用完，其他培養(yǎng)基最多也不要超過1個(gè)月。

2、過濾滅菌：

一些植物生長調(diào)節(jié)劑及有機(jī)物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇熱容易分解，不能與培養(yǎng)基一起進(jìn)行高溫滅菌，而要使用細(xì)菌過濾器濾去其中的雜菌。細(xì)菌過濾器與濾膜（孔徑0.45微米）使用之前要先進(jìn)行高壓滅菌。過濾后的溶液要立即加入培養(yǎng)基中，若為液體培養(yǎng)基，可在培養(yǎng)基冷卻至30℃時(shí)加入；若為固體培養(yǎng)基，必須在培養(yǎng)基凝固之前（50-60℃）加入，振蕩使溶液與其他成分混合均勻。

三、過濾除菌操作時(shí)，濾器和過濾瓶 等裝置使用前用什么設(shè)備進(jìn)行消 毒滅菌

KRBB液的配方是：NaCl 118.5mmol/L, CaCl2 2.54mmol/L, KH2PO4 1.19mmol/L, KCl 4.74mmol/L, NaHCO325mmol/L, MgSO4 1.19mmol/L, HEPES 10mmol/L, BSA 1%)。 而10mmol/L HEPES緩沖液配制方法如下：準(zhǔn)確稱取HEPES 2.383g，加入新鮮三蒸水定容至1

四、過濾除菌操作時(shí)，濾器和過濾瓶 等裝置使用前用什么設(shè)備進(jìn)行消 毒滅菌

KRBB液的配方是：NaCl 118.5mmol/L, CaCl2 2.54mmol/L, KH2PO4 1.19mmol/L, KCl 4.74mmol/L, NaHCO325mmol/L, MgSO4 1.19mmol/L, HEPES 10mmol/L, BSA 1%)。 而10mmol/L HEPES緩沖液配制方法如下：準(zhǔn)確稱取HEPES 2.383g，加入新鮮三蒸水定容至1

五、進(jìn)行過濾操作需用的儀器

鐵架臺(tái)：用來放漏斗

玻璃棒：用來引流

漏斗：把濾紙放在里面

濾紙：用來過濾

燒杯：接過濾后的液體

六、進(jìn)行過濾操作需用的儀器

鐵架臺(tái)：用來放漏斗

玻璃棒：用來引流

漏斗：把濾紙放在里面

濾紙：用來過濾

燒杯：接過濾后的液體