RNA提取過程中如何去除DNA污染?
方法:
1、使用DNA酶DNAseI消化1小時(shí),恒溫37度。
2、離心取上清的時(shí)候,一定要小心不要取到中間的膜和下面的液體。
3、直接加NaOH溶液與提取液混合攪拌,然后離心就可以了.因?yàn)镽NA可溶于NaOH溶液,而DNA不可溶,離心后的上清液就不含有DNA了。
用瓊脂糖凝膠電泳怎么檢測(cè)DNA質(zhì)量,什么是標(biāo)準(zhǔn)?
DNA如果降解或者混有其他雜質(zhì)比如蛋白質(zhì)、RNA的話,在電泳中可以檢測(cè)的到.線性的單一DNA樣品一般是單條帶,質(zhì)粒的話可能會(huì)有2-3條帶.如果條帶變寬、變暗、或者變成彌散的DNA條帶,表示DNA非特異的降解.‘如果條帶變成多條,表示可能被酶切.如果質(zhì)粒被單酶切,可能變成一條亮帶.如果有蛋白質(zhì)污染,上樣孔可能發(fā)亮.如果有RNA污染,可能小分子量部分會(huì)有彌散.等等.標(biāo)準(zhǔn)是電泳條帶亮度.通過亮度可以粗略計(jì)算DNA條帶的含量.如果DNA有損失,對(duì)應(yīng)的條帶會(huì)變暗或者消失
如果DNA出現(xiàn)降解或者是混有其他雜質(zhì),例如蛋白質(zhì)、RNA的話,那么瓊脂糖凝膠就能夠檢測(cè)得到DNA的質(zhì)量。
標(biāo)準(zhǔn)主要是通過觀察電泳條帶的亮度,通過亮度就可以粗略地計(jì)算出DNA條帶的含量。如果DNA出現(xiàn)損失,對(duì)應(yīng)的條帶就會(huì)變暗或者是消失。
DNA檢測(cè)技術(shù)有哪些?
基因檢查方法是通過測(cè)序的辦法進(jìn)行,可以通過一代測(cè)序方法RT-PCR或者Sanger。
近年來出現(xiàn)二代測(cè)序方法,二代測(cè)序方法和一代測(cè)序方法明顯的不同在于一代是針對(duì)個(gè)別已知的基因進(jìn)行檢查,效率低。二代檢測(cè)則是通過高通量,即基因捕獲的辦法進(jìn)行檢查,既可以對(duì)已知的基因進(jìn)行檢查,也可以對(duì)未知的基因檢查,進(jìn)而了解更多與疾病診斷、預(yù)后和治療相關(guān)的基因改變。
如果從基因檢查的取材,即檢查材料方面分,可以分為組織學(xué)檢查和液體活檢。液體活檢就是對(duì)血液、體腔積液,包括胸腔積液或者腹腔積液進(jìn)行相關(guān)的基因檢查。
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