滅菌方法
　　常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法、過(guò)濾除菌法、汽相滅菌法、液相滅菌法。可根據(jù)被滅菌物品的特性采用一種或多種方法組合滅菌。
綜合考慮滅菌工藝的滅菌能力和對(duì)滅菌物品的影響，滅菌工藝可以分為過(guò)度殺滅法、生物負(fù)載/生物指示劑法（也被稱(chēng)為殘存概率法）和生物負(fù)載法。對(duì)耐受的滅菌物品，通常選用過(guò)度殺滅法。
　　物品的無(wú)菌保證與滅菌工藝、滅菌前物品的生物負(fù)載相關(guān)。滅菌工藝開(kāi)發(fā)時(shí)，需要對(duì)物品污染的微生物種類(lèi)、數(shù)目及其耐受性進(jìn)行綜合評(píng)估。
　　滅菌工藝的驗(yàn)證
　　滅菌工藝的驗(yàn)證是無(wú)菌保證的必要條件。滅菌工藝經(jīng)驗(yàn)證后，方可交付正式使用。驗(yàn)證內(nèi)容包括：①撰寫(xiě)驗(yàn)證方案及制定評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)；②確認(rèn)設(shè)備的設(shè)計(jì)與選型；③確認(rèn)滅菌設(shè)備資料齊全、安裝正確，并能正常運(yùn)行；④確認(rèn)滅菌設(shè)備、關(guān)鍵控制和記錄系統(tǒng)能在規(guī)定的參數(shù)范圍內(nèi)正常運(yùn)行；⑤采用被滅菌物品或模擬物品按預(yù)定滅菌程序進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，確認(rèn)各關(guān)鍵工藝參數(shù)符合預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)，確定經(jīng)滅菌物品的無(wú)菌保證水平符合規(guī)定；⑥匯總并完善各種文件和記錄，撰寫(xiě)驗(yàn)證報(bào)告。
　　滅菌工藝的日常監(jiān)控
　　日常生產(chǎn)中，應(yīng)對(duì)滅菌工藝的運(yùn)行情況進(jìn)行監(jiān)控，確認(rèn)關(guān)鍵參數(shù)（如溫度、壓力、時(shí)間、濕度、滅菌氣體濃度及吸收的輻射劑量等）均在驗(yàn)證確定的范圍內(nèi)。同時(shí)應(yīng)持續(xù)評(píng)估滅菌工藝的有效性及被滅菌物品的安全性和穩(wěn)定性，并建立相應(yīng)的變更和偏差控制程序，確保滅菌工藝持續(xù)處于受控狀態(tài)。滅菌工藝應(yīng)定期進(jìn)行再驗(yàn)證。當(dāng)滅菌設(shè)備或程序發(fā)生變更（包括滅菌物品裝載方式和數(shù)量的改變）時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重新驗(yàn)證。
　　驗(yàn)證及日常監(jiān)控階段，可根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果對(duì)微生物的種類(lèi)、數(shù)目及耐受性進(jìn)行監(jiān)控。在生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)應(yīng)采取各種措施降低生物負(fù)載，確保生物負(fù)載控制在規(guī)定的限度內(nèi)。滅菌結(jié)束后，應(yīng)采取措施防止已滅菌物品被再次污染。任何情況下，都應(yīng)要求容器及其密封系統(tǒng)確保物品在有效期內(nèi)符合無(wú)菌要求。
　　滅菌方法
　　常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法、過(guò)濾除菌法、汽相滅菌法、液相滅菌法。可根據(jù)被滅菌物品的特性采用一種或多種方法組合滅菌。
　　濕熱滅菌法
　　本法系指將物品置于滅菌設(shè)備內(nèi)利用飽和蒸汽、蒸汽-空氣混合物、蒸汽-空氣-水混合物、過(guò)熱水等手段使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。該法滅菌能力強(qiáng)，為熱力滅菌中最有效、應(yīng)用最廣泛的滅菌方法。藥品、容器、培養(yǎng)基、無(wú)菌衣、膠塞以及其他遇高溫和潮濕性能穩(wěn)定的物品，均可釆用本法滅菌。流通蒸汽不能有效殺滅細(xì)菌孢子，一般可作為不耐熱無(wú)菌產(chǎn)品的輔助處理手段。
　　濕熱滅菌工藝的開(kāi)發(fā)應(yīng)考慮被滅菌物品的熱穩(wěn)定性、熱穿透性、生物負(fù)載等因素。濕熱滅菌通常采用溫度-時(shí)間參數(shù)或者結(jié)合F0值(F0值為標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間，系滅菌過(guò)程賦予被滅菌物品121℃下的等效滅菌時(shí)間)綜合考慮，無(wú)論釆用何種控制參數(shù)，都必須證明所釆用的滅菌工藝和監(jiān)控措施在日常運(yùn)行過(guò)程中能確保物品滅菌后的PNSU≤10-6。多孔或堅(jiān)硬物品等可采用飽和蒸汽直接接觸的方式進(jìn)行滅菌，滅菌過(guò)程中應(yīng)充分去除腔體和待滅菌物品中的空氣和冷凝水，以避免殘留空氣阻止蒸汽到達(dá)所有暴露的表面，從而破壞飽和蒸汽的溫度-壓力關(guān)系。對(duì)裝有液體的密閉容器進(jìn)行滅菌，滅菌介質(zhì)先將熱傳遞到容器表面，再通過(guò)傳導(dǎo)和對(duì)流的方式來(lái)實(shí)現(xiàn)內(nèi)部液體的滅菌，必要時(shí)可采用空氣過(guò)壓的方式平衡容器內(nèi)部和滅菌設(shè)備腔體之間的壓差，避免影響容器的密閉完整性。
　　采用濕熱滅菌時(shí)，被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)难b載方式。裝載方式的確認(rèn)應(yīng)考慮被滅菌物品最大、最小和生產(chǎn)過(guò)程中典型的裝載量和排列方式等，確保滅菌的有效性和重現(xiàn)性。裝載熱分布試驗(yàn)應(yīng)盡可能使用被滅菌物品，如果釆用類(lèi)似物替代，應(yīng)結(jié)合物品的熱力學(xué)性質(zhì)等進(jìn)行適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。熱穿透試驗(yàn)應(yīng)將足夠數(shù)量的溫度探頭置于被滅菌物品內(nèi)部的冷點(diǎn)。如有數(shù)據(jù)支持或有證據(jù)表明將探頭置于物品外部也能反映出物品的熱穿透情況，也可以考慮將探頭置于物品外部。
　　微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)用來(lái)進(jìn)一步確認(rèn)滅菌效果，生物指示劑的放置位置應(yīng)結(jié)合被滅菌物品的特點(diǎn)、裝載熱分布以及熱穿透試驗(yàn)結(jié)果來(lái)確定。應(yīng)根據(jù)滅菌工藝選擇適宜的生物指示劑。過(guò)度殺滅法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪地芽孢桿菌(Geobacillus stearothermophilus)，熱不穩(wěn)定性物品滅菌常用的生物指示劑為生孢梭菌（Clostridium sporo-genes)，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）和凝結(jié)芽孢桿菌（Bacillus coagulans）。
　　對(duì)于釆用生物負(fù)載/生物指示劑法和生物負(fù)載法的滅菌工藝，日常生產(chǎn)全過(guò)程應(yīng)對(duì)物品中污染的微生物進(jìn)行連續(xù)地、嚴(yán)格地監(jiān)控，并釆取各種措施降低微生物污染水平，特別是防止耐熱菌的污染。
　　濕熱滅菌在冷卻階段應(yīng)采取措施防止已滅菌物品被再次污染。
　　干熱滅菌法
　　本法系指將物品置于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設(shè)備中，利用干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品滅菌，如玻璃器具、金屬制容器、纖維制品、陶瓷制品、固體試藥、液狀石蠟等均可采用本法滅菌。
　　干熱滅菌法的工藝開(kāi)發(fā)應(yīng)考慮被滅菌物品的熱穩(wěn)定性、熱穿透力、生物負(fù)載(或內(nèi)毒素污染水平)等因素。干熱滅菌條件采用溫度-時(shí)間參數(shù)或者結(jié)合FH值(FH值為標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間，系滅菌過(guò)程賦予被滅菌物品160℃下的等效滅菌時(shí)間)綜合考慮。干熱滅菌溫度范圍一般為160~190℃，當(dāng)用于除熱原時(shí)，溫度范圍一般為170~400℃，無(wú)論釆用何種滅菌條件，均應(yīng)保證滅菌后的物品的PNSU≤10-6。
　　裝載方式的確認(rèn)應(yīng)考慮被滅菌物品最大和最小的裝載量和排列方式等，對(duì)于連續(xù)干熱滅菌設(shè)備還應(yīng)考慮傳送帶運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)不同位置可能產(chǎn)生的溫度差異，同時(shí)應(yīng)關(guān)注熱力難以穿透的物品，以保證滅菌的有效性和重現(xiàn)性。由于空氣熱導(dǎo)性較差，應(yīng)通過(guò)熱分布和熱穿透試驗(yàn)確認(rèn)冷點(diǎn)能夠達(dá)到預(yù)期的滅菌效果。微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)用生物指示劑通常選擇萎縮芽孢桿菌（Bacillus astrophaeus)。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)是證明除熱原過(guò)程有效性的試驗(yàn)。一般將不小于1000單位的細(xì)菌內(nèi)毒素加入待去熱原的物品中，證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素至少下降3個(gè)對(duì)數(shù)單位。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)所用的細(xì)菌內(nèi)毒素一般為大腸埃希菌內(nèi)毒素(Escherichia coli endoxin)。
　　滅菌設(shè)備內(nèi)的空氣應(yīng)當(dāng)循環(huán)并保持正壓。進(jìn)入干熱滅菌生產(chǎn)設(shè)備的空氣應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)高效過(guò)濾器過(guò)濾，高效過(guò)濾器應(yīng)定期進(jìn)行檢漏測(cè)試以確認(rèn)其完整性。
　　輻射滅菌法
　　本法系指利用電離輻射殺滅微生物的方法。常用的輻射射線有60Co或137Cs衰變產(chǎn)生的γ射線、電子加速器產(chǎn)生的電子束和X射線裝置產(chǎn)生的X射線。能夠耐輻射的醫(yī)療器械、生產(chǎn)輔助用品、藥品包裝材料、原料藥及成品等均可用本法滅菌。
　　輻射滅菌工藝的開(kāi)發(fā)應(yīng)考慮被滅菌物品對(duì)電離輻射的耐受性以及生物負(fù)載等因素。為保證滅菌過(guò)程不影響被滅菌物品的安全性、有效性及穩(wěn)定性，應(yīng)確定最大可接受劑量。輻射滅菌控制的參數(shù)主要是輻射劑量(指滅菌物品的吸收劑量)，滅菌劑量的建立應(yīng)確保物品滅菌后的PNSU≤10-6。輻射滅菌應(yīng)盡可能采用低輻射劑量。
　　輻射滅菌驗(yàn)證的關(guān)鍵在于劑量分布測(cè)試，在開(kāi)展劑量分布測(cè)試前，應(yīng)規(guī)定滅菌物品的包裝形式、密度以及裝載模式等。通過(guò)劑量分布測(cè)試，確定滅菌過(guò)程的最大和最小劑量值及其位置，如果日常監(jiān)測(cè)使用參照計(jì)量位置，還需確定其劑量值與最大和最小劑量值之間的關(guān)系。輻射滅菌一般不采用生物指示劑進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)。
　　日常使用中，應(yīng)進(jìn)行生物負(fù)載監(jiān)控和定期劑量審核，確保輻射滅菌效果及劑量的持續(xù)有效。滅菌時(shí)，應(yīng)采用劑量計(jì)對(duì)滅菌物品吸收的輻射劑量進(jìn)行監(jiān)控，劑量計(jì)放置的位置應(yīng)經(jīng)驗(yàn)證確定，以充分證實(shí)滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi)。劑量測(cè)量應(yīng)溯源到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或是國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。
　　氣體滅菌法
　　本法系指用化學(xué)滅菌劑形成的氣體殺滅微生物的方法。本法最常用的化學(xué)滅菌劑是環(huán)氧乙烷，一般與80%~90%的惰性氣體混合使用，在充有滅菌氣體的高壓腔室內(nèi)進(jìn)行。釆用氣體滅菌法時(shí)，應(yīng)注意滅菌氣體的可燃可爆性、致畸性和殘留毒性。該法適用于不耐高溫、不耐輻射物品的滅菌，如醫(yī)療器械、塑料制品和藥品包裝材料等，干粉類(lèi)產(chǎn)品不建議采用本法滅菌。
　　采用本法滅菌需確認(rèn)經(jīng)過(guò)解析工藝后，滅菌氣體和反應(yīng)產(chǎn)物殘留量不會(huì)影響被滅菌物品的安全性、有效性和穩(wěn)定性。采用環(huán)氧乙烷滅菌時(shí)，腔室內(nèi)的溫度、濕度、滅菌氣體濃度、滅菌時(shí)間是影響滅菌效果的重要因素。
　　氣體滅菌工藝的驗(yàn)證，應(yīng)考慮物品包裝材料和滅菌腔室中物品的排列方式對(duì)滅菌氣體的擴(kuò)散和滲透的影響。環(huán)氧乙烷氣體滅菌的生物指示劑一般采用萎縮芽孢桿菌(Bacillus atrophaeus)。
　　采用環(huán)氧乙烷滅菌時(shí)，應(yīng)進(jìn)行泄漏試驗(yàn)，以確認(rèn)滅菌腔室的密閉性。滅菌后，可通過(guò)經(jīng)驗(yàn)證的解析步驟，使殘留環(huán)氧乙烷和其他易揮發(fā)性殘留物消散，并對(duì)滅菌物品中的環(huán)氧乙烷殘留物和反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行監(jiān)控，以證明其不超過(guò)規(guī)定的濃度，避免產(chǎn)生毒性。
　　過(guò)濾除菌法
　　本法系指釆用物理截留去除氣體或液體中微生物的方法。常用于氣體、熱不穩(wěn)定溶液的除菌。
　　過(guò)濾除菌工藝開(kāi)發(fā)時(shí)，應(yīng)根據(jù)待過(guò)濾介質(zhì)屬性及工藝目的選擇合適的過(guò)濾器。除菌級(jí)過(guò)濾器的濾膜孔徑選用0.22μm(或更小孔徑或相同過(guò)濾效力)，過(guò)濾器的孔徑定義來(lái)自過(guò)濾器對(duì)微生物的截留能力，而非平均孔徑的分布系數(shù)。選擇過(guò)濾器材質(zhì)時(shí)，應(yīng)充分考察其與待過(guò)濾介質(zhì)的兼容性。過(guò)濾器不得因與待過(guò)濾介質(zhì)發(fā)生反應(yīng)、釋放物質(zhì)或吸附作用而對(duì)過(guò)濾產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生不利影響，不得有纖維脫落，禁用含石棉的過(guò)濾器。為保證過(guò)濾除菌效果，可使用兩個(gè)除菌級(jí)的過(guò)濾器串聯(lián)過(guò)濾，主過(guò)濾器前增加的除菌級(jí)過(guò)濾器即為冗余過(guò)濾器，并須保證這兩級(jí)過(guò)濾器之間的無(wú)菌性。
　　過(guò)濾除菌法常用的挑戰(zhàn)微生物為缺陷短波單胞菌(Brevundimonas diminuta)。除菌級(jí)過(guò)濾器的截留試驗(yàn)要求是在規(guī)定條件下，在有效過(guò)濾面積內(nèi)每平方厘米截留缺陷短波單胞菌的能力達(dá)到107cfu，但在有些情況下，缺陷短波單胞菌不能代表最差條件，則需要考慮采用生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)的最差條件細(xì)菌進(jìn)行截留試驗(yàn)。
　　在每一次過(guò)濾除菌后應(yīng)立即進(jìn)行濾器的完整性試驗(yàn)，即起泡點(diǎn)試驗(yàn)、擴(kuò)散流/前進(jìn)流試驗(yàn)或水侵入法測(cè)試，確認(rèn)濾膜在除菌過(guò)濾過(guò)程中的有效性和完整性。過(guò)濾除菌前是否進(jìn)行完整性測(cè)試可根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確定。滅菌前進(jìn)行完整性測(cè)試應(yīng)考慮濾芯在滅菌過(guò)程中被損壞的風(fēng)險(xiǎn)；滅菌后進(jìn)行完整性測(cè)試應(yīng)采取措施保證過(guò)濾器下游的無(wú)菌性。
　　過(guò)濾除菌前，產(chǎn)品的生物負(fù)載應(yīng)控制在規(guī)定的限度內(nèi)。過(guò)濾器使用前必須經(jīng)過(guò)滅菌處理(如在線或離線蒸汽滅菌，輻射滅菌等)。在線蒸汽滅菌的設(shè)計(jì)及操作過(guò)程應(yīng)關(guān)注濾芯可耐受的最高壓差及溫度。
　　與過(guò)濾除菌相關(guān)的設(shè)備、包裝容器及其他物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌，并防止再污染。
　　汽相滅菌法
　　本法系指通過(guò)分布在空氣中的滅菌劑殺滅微生物的方法。常用的滅菌劑包括過(guò)氧化氫（H2O2）、過(guò)氧乙酸(CH3CO3CH)等。汽相滅菌適用于密閉空間的內(nèi)表面滅菌。
　　汽相滅菌效果與滅菌劑量(一般是指注入量)、相對(duì)濕度和溫度有關(guān)。裝載方式的確認(rèn)應(yīng)考慮密閉空間內(nèi)部物品的裝載量和排列方式。微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)用來(lái)確認(rèn)滅菌效果，生物指示劑的放置位置應(yīng)包括滅菌劑最難到達(dá)的位置。汽相滅菌用生物指示劑一般為嗜熱脂肪地芽孢桿菌(Geobacillus stearothermophilus)、萎縮芽孢桿菌(Bacillus atrophaeus)、生孢梭菌(Clostridium sporogenes)等。
　　日常使用中，汽相滅菌前滅菌物品應(yīng)進(jìn)行清潔。滅菌時(shí)應(yīng)最大限度地暴露表面，確保滅菌效果。滅菌后應(yīng)將滅菌劑殘留充分去除或滅活。
　　液相滅菌法
　　本法系指將被滅菌物品完全浸泡于滅菌劑中達(dá)到殺滅物品表面微生物的方法。具備滅菌能力的滅菌劑包括：甲醛、過(guò)氧乙酸、氫氧化鈉、過(guò)氧化氫、次氯酸鈉等。
　　滅菌劑種類(lèi)的選擇應(yīng)考慮滅菌物品的耐受性。滅菌劑濃度、溫度、pH值、生物負(fù)載、滅菌時(shí)間、被滅菌物品表面的污染物等是影響滅菌效果的重要因素。
　　滅菌工藝驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)考慮滅菌物品表面積總和最大的裝載方式，并確保滅菌劑能夠接觸到所有表面，如狹小孔徑物品的內(nèi)表面。微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)常用的生物指示劑是萎縮芽孢桿菌(Bacillusatrophaeus)和枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。通過(guò)重復(fù)試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證滅菌劑濃度和滅菌時(shí)間等滅菌參數(shù)條件。滅菌后應(yīng)將滅菌劑殘留充分去除或滅活。
　　滅菌劑殘留去除階段，應(yīng)采取措施防止已滅菌物品被再次污染。使用滅菌劑的全過(guò)程都應(yīng)采取適當(dāng)?shù)陌踩胧?/code>