加標(biāo)回收率用濃度還是質(zhì)量濃度計(jì)算 回收率的計(jì)算公式?
一、回收率的計(jì)算公式?
加入已知濃度A的待測(cè)物質(zhì),用該方法測(cè)定其濃度值B,回收率=(A/B)×100%.注:已知濃度A應(yīng)在該檢測(cè)方法的可以檢測(cè)濃度范圍內(nèi)。
加標(biāo)回收率,一般是測(cè)定樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度為C;再取另一份樣品,加入定量待測(cè)物質(zhì)(定量加入待測(cè)物質(zhì)的理論濃度為E)(加入待測(cè)物質(zhì)的量最好與樣品中待測(cè)物質(zhì)的量一樣)測(cè)定其濃度為D,加標(biāo)回收率=((D-C)/E)×100%.
二、求回收率函數(shù)公式?
??回收率的計(jì)算公式:回收率=(A/B)×100%,而回收率包括絕對(duì)回收率和相對(duì)回收率,其中絕對(duì)回收率考察的是經(jīng)過(guò)樣品處理后能用于分析的藥物的比例。因?yàn)椴徽撌巧锘|(zhì)還是制劑輔料中的藥物,經(jīng)過(guò)樣品處理都有一定的損失。
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??相對(duì)回收率嚴(yán)格來(lái)說(shuō)有兩種,一種是回收試驗(yàn)法,另一種是加樣回收試驗(yàn)法。前者是在空白基質(zhì)中加入藥品,標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)也是如此,這種測(cè)定用得較多,但有標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)重復(fù)測(cè)定的嫌疑。第二種是在已知濃度樣品中加入藥物,來(lái)和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比,標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)也是在基質(zhì)中加藥物。
三、膠回收產(chǎn)物濃度一般在多少?
膠回收產(chǎn)物濃度在0.03pmol/ul濃度屬于正常。
膠回收的關(guān)鍵是通過(guò)柱子的溶液的鹽濃度、酸堿性(電荷)和疏水性使DNA與柱子結(jié)合。因此,若電泳緩沖液的PH偏高,可在溶膠液中加入10ul(PH 5.0,3mol/L的 NaAC);為了使DNA分子更好的攔截在膜上,可以添加30%異丙醇在加熱溶解膠后的液體里。
將柱子在室溫放置幾分鐘(大約需10分鐘),以使乙醇充分揮發(fā)。少加些洗脫液,盡量減少回收體積,一般用30-50μl洗脫液洗脫(不能太少,否則無(wú)法浸濕膜反而不利于洗脫)。洗脫液滴在膜中央,以充分洗脫結(jié)合在膜上的DNA。
膠回收產(chǎn)物介紹:
如果要膠回收,最好還是用試劑盒,方便,回收率也略高。實(shí)在要手工回收,可以切膠后加入3倍體積TE,水浴熔化,酚、酚/氯仿抽提干凈,乙醇沉淀即可。如果PCR擴(kuò)增特異性好,只是簡(jiǎn)單的PCR產(chǎn)物純化回收。
可以在PCR產(chǎn)物中加入50ug/ml 的蛋白酶K,37度1h,酚/氯仿抽提一次,氯仿抽提一次,上清加入0.1體積的醋酸鈉,2.5體積的無(wú)水乙醇沉淀回收。
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